久久超碰99,91一区二区三区四区,精品捆绑调教一区二区三区,日韩国产欧美三级

Document

當(dāng)前位置：文庫百科 ? 文章詳情

WB實(shí)驗(yàn)中的轉(zhuǎn)膜與抗體結(jié)合步驟詳解

來源：時(shí)間：2024-01-08 09:59:01 瀏覽：7074次

WB實(shí)驗(yàn)中的轉(zhuǎn)膜與抗體結(jié)合步驟詳解

蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot，WB）是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平和分子量的技術(shù)，WB實(shí)驗(yàn)包括樣品制備、SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體結(jié)合及顯色等多個(gè)步驟。

一、轉(zhuǎn)膜

轉(zhuǎn)膜是將SDS-PAGE電泳分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固定在固相支持物上的過程，轉(zhuǎn)膜方法有向上毛細(xì)管轉(zhuǎn)移、向下毛細(xì)管轉(zhuǎn)移、電轉(zhuǎn)移和真空轉(zhuǎn)移等；固相支持物主要有硝酸纖維素膜和尼龍膜，硝酸纖維素膜是非共價(jià)結(jié)合，易脆，而尼龍膜是帶正電荷的，高強(qiáng)度，不易破損，具有較大的DNA結(jié)合容量，在轉(zhuǎn)膜過程中，需要將分離膠上的蛋白質(zhì)完全轉(zhuǎn)移到膜上，以便后續(xù)的抗體結(jié)合和檢測(cè)。

二、抗體結(jié)合

抗體結(jié)合是WB實(shí)驗(yàn)的核心步驟，主要包括一抗孵育、洗滌、二抗孵育和洗滌等過程。

1. 一抗孵育：將特異性一抗添加到轉(zhuǎn)膜后的膜上，孵育過程中一抗與目標(biāo)蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合，一抗的濃度和孵育時(shí)間需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行調(diào)整；一般情況下，一抗的濃度在1:1000-1:10000之間，孵育時(shí)間為1-2小時(shí)，在孵育過程中，需要保持膜的濕潤，可以使用封閉液或抗體稀釋液進(jìn)行濕潤。

2. 洗滌：用緩沖液（如TBST）反復(fù)洗滌膜上未結(jié)合的一抗，洗滌的次數(shù)和時(shí)間需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行調(diào)整，一般洗滌3-5次，每次5-10分鐘；洗滌的目的是去除未結(jié)合的一抗，避免后續(xù)的顯色反應(yīng)受到干擾。

3. 二抗孵育：將與一抗匹配的二抗加入到膜上，孵育過程中二抗與一抗結(jié)合，二抗的濃度和孵育時(shí)間也需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行調(diào)整；一般情況下，二抗的濃度在1:1000-1:10000之間，孵育時(shí)間為1-2小時(shí)，同樣需要保持膜的濕潤。

4. 洗滌：用緩沖液（如TBST）反復(fù)洗滌膜上未結(jié)合的二抗；洗滌的次數(shù)和時(shí)間需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行調(diào)整，一般洗滌3-5次，每次5-10分鐘。

三、注意事項(xiàng)

1. 在轉(zhuǎn)膜過程中，需要控制好轉(zhuǎn)膜電壓和時(shí)間，以及膜的濕度和尺寸，避免影響蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移效率。

2. 在抗體結(jié)合過程中，需要注意一抗和二抗的濃度和孵育時(shí)間，避免過度或不足結(jié)合。

3. 洗滌步驟是去除未結(jié)合抗體的重要環(huán)節(jié)，需要充分洗滌，避免背景雜亂。

4. 實(shí)驗(yàn)過程中需要保持膜的濕潤，避免膜干燥影響抗體結(jié)合。

5. 在顯色過程中，需要均勻涂抹ECL顯色液，避免顯色不均。

上一篇：支春義團(tuán)隊(duì)EES.：空間位阻效應(yīng)提升ZnO負(fù)極的電化學(xué)還原動(dòng)力學(xué)！

下一篇：透射電鏡在細(xì)胞結(jié)構(gòu)研究中的價(jià)值

相關(guān)文章

BET氣體吸附原理及其技術(shù)發(fā)展

2025-02-21

熱重分析（TG-DTG）曲線的幾種解析方法

2023-12-26

一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應(yīng)用技術(shù)

2023-10-08

一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

2023-11-23

接觸角測(cè)試（CA）的原理、樣品制備要求及實(shí)際應(yīng)用

2023-11-16

?細(xì)胞熱遷移分析技術(shù)cetsa的具體原理和實(shí)驗(yàn)流程

2024-11-29

項(xiàng)目推薦/Project

蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（WB）

熱門文章/popular

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

手把手教你用ChemDraw 畫化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

電化學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之電化學(xué)工作站篇（二）三電極和兩電極體系的搭建和測(cè)試

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章

久久超碰99,91一区二区三区四区,精品捆绑调教一区二区三区,日韩国产欧美三级

舉報(bào)有獎(jiǎng)

TEL: 191-3608-6524

如：在網(wǎng)絡(luò)上惡意使用“測(cè)試狗”等相關(guān)關(guān)鍵詞誤導(dǎo)用戶點(diǎn)擊、惡意盜用測(cè)試狗商標(biāo)、冒稱官方工作人員等情形，請(qǐng)您向我們舉報(bào)，經(jīng)查實(shí)后，我們將給予您獎(jiǎng)勵(lì)。

舉報(bào)內(nèi)容：

200

上傳附件：

文件格式不正確，請(qǐng)重新上傳文件格式不正確，請(qǐng)重新上傳文件格式不正確，請(qǐng)重新上傳

文件格式：jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar

聯(lián)系方式

姓名

電話

提交意見

意見反饋

Suggestions

您可以在此留下您寶貴的意見，您的意見或問題反饋將會(huì)成為我們不斷改進(jìn)的動(dòng)力。

意見類型

測(cè)試服務(wù)

網(wǎng)站功能

財(cái)務(wù)報(bào)賬

其他類型

意見內(nèi)容

200

聯(lián)系方式

姓名

電話

提交意見

+

你好，很高興為您服務(wù)！

發(fā)送