久久超碰99,91一区二区三区四区,精品捆绑调教一区二区三区,日韩国产欧美三级

Document

當(dāng)前位置：文庫百科 ? 文章詳情

生物樣本透射電鏡測試的各類樣品制備方法

來源：時間：2024-11-05 10:52:15 瀏覽：7026次

生物樣本透射電鏡測試的各類樣品制備方法

生物樣本透射電鏡（Transmission Electron Microscopy，簡稱TEM）是一種利用電子束穿透樣品進(jìn)行成像和分析的顯微技術(shù)，具有極高的分辨率，能夠觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)、病毒、蛋白質(zhì)等生物樣品的納米級細(xì)節(jié)；為了獲得高質(zhì)量的TEM圖像，樣品的制備至關(guān)重要。

一、概述

透射電鏡樣品制備的基本目標(biāo)是保持生物樣品的自然狀態(tài)，同時提高樣品的電子透明度，以便電子束能夠穿透并產(chǎn)生清晰的圖像；制備過程通常包括固定、脫水、滲透、包埋、切片、染色和安裝等步驟。

二、樣品制備方法

（一）固定

固定是樣品制備的第一步，目的是迅速殺死細(xì)胞，并盡可能保持其生前狀態(tài)；常用的固定劑有戊二醛和鋨酸，戊二醛能快速穿透細(xì)胞，固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，而鋨酸則固定細(xì)胞核和細(xì)胞器。

1. 戊二醛固定：將樣品置于2.5%的戊二醛溶液中，4℃下固定數(shù)小時至過夜。

2. 鋨酸固定：戊二醛固定后，用鋨酸進(jìn)行后固定，通常在4℃下進(jìn)行1-2小時。

（二）脫水

脫水是為了去除細(xì)胞中的水分，以便后續(xù)的滲透和包埋。常用的脫水劑有乙醇和丙酮，濃度從30%逐漸增加到100%。

（三）滲透

滲透是將脫水劑替換為能與包埋劑相容的溶劑，如環(huán)氧樹脂，使包埋劑能夠滲透到細(xì)胞內(nèi)部。

（四）包埋

包埋是將樣品嵌入到固體介質(zhì)中，以便進(jìn)行切片。常用的包埋劑有環(huán)氧樹脂、聚酯樹脂等。

（五）切片

切片是將包埋好的樣品切割成超薄（通常50-100納米）的切片，以供TEM觀察。切片方法有超薄切片和冷凍切片等。

1. 超薄切片：使用超薄切片機(jī)，如萊卡UC6或鉆石刀，獲得超薄切片。

2. 冷凍切片：在冷凍狀態(tài)下，使用冷凍切片機(jī)切割樣品。

（六）染色

染色是為了增強(qiáng)樣品的對比度，使其在TEM下更容易觀察。常用的染色劑有醋酸鈾、檸檬酸鉛等。

（七）安裝

將染色后的切片安裝在TEM專用的銅網(wǎng)或微柵上，準(zhǔn)備進(jìn)行TEM觀察。

三、特殊樣品制備方法

1. 細(xì)胞內(nèi)特定結(jié)構(gòu)的標(biāo)記：對于需要觀察細(xì)胞內(nèi)特定結(jié)構(gòu)的情況，可以使用免疫金標(biāo)記、免疫電子顯微鏡技術(shù)等對目標(biāo)結(jié)構(gòu)進(jìn)行標(biāo)記。

2. 原位雜交：原位雜交技術(shù)可用于檢測細(xì)胞內(nèi)特定的RNA或DNA序列，結(jié)合TEM技術(shù)，可以觀察到特定序列在細(xì)胞內(nèi)的分布。

3. 冷凍斷裂技術(shù)：冷凍斷裂技術(shù)適用于研究細(xì)胞膜的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。樣品在冷凍狀態(tài)下斷裂，暴露出細(xì)胞膜的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，然后進(jìn)行TEM觀察。

四、注意事項

1. 在整個制備過程中，要盡量減少對樣品的損傷，保持其原始結(jié)構(gòu)。

2. 確保固定、脫水、滲透、包埋等步驟的試劑和設(shè)備清潔，避免污染。

3. 切片時要保證切片的厚度均勻，以便獲得高質(zhì)量的TEM圖像。

4. 染色過程中要控制染色時間，避免過度染色。

上一篇：偏光顯微鏡的定義和用途

下一篇：高分辨率質(zhì)譜ICP-MS技術(shù)在環(huán)境科學(xué)的應(yīng)用

相關(guān)文章

BET氣體吸附原理及其技術(shù)發(fā)展

2025-02-21

熱重分析（TG-DTG）曲線的幾種解析方法

2023-12-26

一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應(yīng)用技術(shù)

2023-10-08

一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

2023-11-23

接觸角測試（CA）的原理、樣品制備要求及實際應(yīng)用

2023-11-16

?細(xì)胞熱遷移分析技術(shù)cetsa的具體原理和實驗流程

2024-11-29

項目推薦/Project

生物樣本透射電鏡（TEM）

熱門文章/popular

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

手把手教你用ChemDraw 畫化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

電化學(xué)實驗基礎(chǔ)之電化學(xué)工作站篇（二）三電極和兩電極體系的搭建和測試

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章

久久超碰99,91一区二区三区四区,精品捆绑调教一区二区三区,日韩国产欧美三级

舉報有獎

TEL: 191-3608-6524

如：在網(wǎng)絡(luò)上惡意使用“測試狗”等相關(guān)關(guān)鍵詞誤導(dǎo)用戶點(diǎn)擊、惡意盜用測試狗商標(biāo)、冒稱官方工作人員等情形，請您向我們舉報，經(jīng)查實后，我們將給予您獎勵。

舉報內(nèi)容：

200

上傳附件：

文件格式不正確，請重新上傳文件格式不正確，請重新上傳文件格式不正確，請重新上傳

文件格式：jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar

聯(lián)系方式

姓名

電話

提交意見

意見反饋

Suggestions

您可以在此留下您寶貴的意見，您的意見或問題反饋將會成為我們不斷改進(jìn)的動力。

意見類型

測試服務(wù)

網(wǎng)站功能

財務(wù)報賬

其他類型

意見內(nèi)容

200

聯(lián)系方式

姓名

電話

提交意見

+

你好，很高興為您服務(wù)！

發(fā)送